1  胚胎因素

1．1胚胎质量

根据Lindner和Wright[hI的方法对胚胎分级后的研究显示，胚胎移植妊娠率随胚胎等级的降低而降低，当胚胎从1级降到4级时，其移植妊娠率降低23．6％；张淑云(2007)将胚胎分为最好、好、正常和差4个等级，其最好和好2个等级的移植妊娠率显著高于正常级，而正常级的移植妊娠率又显著高于差级；采用形态学方法将胚胎分为A级(优秀级)、B级(良好级)、C级(一般级)、D级(不良级)4个等级后的研究显示，A级胚胎比B级胚胎移植妊娠率高20％。胚胎质量的好坏对胚胎移植妊娠率有重要的影响，胚胎的等级越高，对环境不利因素的耐受力越强，移植后的妊娠率越高。

1．2鲜胚和冻胚

Spell等(2001)研究显示，鲜胚的移植妊娠率为83％，而冻胚的移植妊娠率为69％啪；Hasler(2001)的两次研究结果显示，鲜胚的移植妊娠率分别为68.3％和77．1％，而冻胚的移植妊娠率分别为58．4％和68．7％。由于冻胚移植的冷冻和解冻过程降低胚胎的存活率，因此，鲜胚比冻胚的移植妊娠率一般高10％～15％，也有报道为8．5％～14％。

1．3胚胎的发育阶段

选择早期的囊胚移植到供体、受体发情时间高度一致的受体奶牛，获得最高的移植妊娠率；选择早期桑椹胚移植到受体发情晚于供体的奶牛是有效的，而移植到受体发情与供体高度一致或早予供体的受体奶牛中是无效的；选择晚期桑椹胚移植到受体发情晚于供体的奶牛是无效的，对移植妊娠率没有影响；选择孵化囊胚或退化囊胚(collapsed blasto cyst)移植到受体发情早于供体的受体奶牛中是无效的，而移植到受体发情与供体高度一致或晚于供体不超过12 h的受体奶牛中时，其移植妊娠率稍高。早期囊胚的移植妊娠率显著高于桑椹胚和中期囊胚。

2受体因素

2．1受体牛黄体特性

研究表明，充满液体的黄体可能是早期胚胎死亡的一个原因，然而，Spell等(2001)的研究显示，黄体中有液体填充腔(fluid—filled lumen)与黄体中无液体填充腔的受体间的妊娠率无显著差异。不论用直肠触摸法和超声波检测法来决定黄体的大小，受体妊娠率和黄体大小间都不存在任何的关联。研究结果还显示，受体牛黄体位置和黄体等级与胚胎移植妊娠率间无明显关系。胚胎移植的妊娠率与黄体特性无关。因此，判断受体是否适合胚胎移植的标准是观察到的发情和有触感的黄体，而不需考虑黄体的质量、大小和位置。

2．2受体牛孕酮水平

维持妊娠、安官保胎是孕酮最重要的作用，牛建立妊娠的适宜孕酮浓度为2．O～5．0 ng／mL，孕酮浓度大于4．5 ng／mL、位于3．5～4．5之间及小于3．35 ng／mL的受体牛的胚胎移植妊娠率差异不显著[7]。177个已孕受体中，仅有8个受体的孕酮浓度小于O．5 ng／mL(于发情周期的第10，11和12 d的测量值)。

2．3受体牛同期发情处理

同期发情处理可以使供体母畜与受体母畜实现同期发情，满足胚胎移植对供体和受体母畜在生殖生理状态上必须一致的要求。分别采用阴道栓(controlled internal drug release dispenser，CIDR)+氯前列烯醇(PGF2α

2．4受体牛营养状况

受体牛的营养状况直接影响着受体牛的繁殖机能。短期或中期缺乏营养的母牛可以通过调用自身的储存来解决，但是会影响移植妊娠率和产犊率，若长期缺乏营养，受体牛消瘦，以致乏情，影响繁殖力。如果受体过肥时，可引起妊娠后的热应激现象出现，影响妊娠率。理想的体况评分是在胚胎移植时为2分，产犊时为2．5分。何光中等针对贵州本地黄牛营养不足的情况，在对本地黄牛进行同期发处理前，采用补饲混合精料的方法，结果补饲组发情率和妊娠率都明显高于不补饲组；李树静等报道，放牧补饲牛群胚胎移植的成功率为48．5％，显著高于放牧不补饲受体牛的35．6％。

2．5受体牛的健康状况

受体牛的生殖系统疾病是影响胚胎移植妊娠率的主要因素，大多数危及健康的疾病都会影响牛的生殖过程。受体牛除了要求无生殖系统疾病外，还必须无如下疾病：结核病、布氏杆菌病、地方性牛白血病、牛病毒性或粘膜性疾病。同时应该免疫过牛鼻气管炎、钩端螺旋体病等传染性疾病。

3  受体母牛与胚胎供体间的同期化因素

胚胎移植的基本原则之一就是胚胎供体与受体在生理学上的一致性，如果受体发情时间与供体一致或其提前时间小于12 h，则可获得更高移植妊娠率，当受体比供体发情晚12 h以上，胚胎移植妊娠率就下降。对水牛而言，当受体与供体的发情同期化在12 h以内，可获得较高的移植妊娠率(41％)，若相差12 h，胚胎移植妊娠率受到影响(18％)，受体与供体的发情同期化超出12 h，胚胎不能着床。

4移植人员的操作技术水平

牛的非手术胚胎移植是靠操作者隔着直肠进行操作，对于生殖系统是否发育良好，是否有利于移植器插入，是否有繁殖疾病，卵巢是否有黄体存在及存在于左侧还是右侧，以及最后把胚胎植入有黄体侧子宫角等全凭操作者的感觉和经验，所以经验丰富的熟练操作者与一般的技术人员相比，胚胎移植的妊娠率会有很大差异，高的可达60%以上，低的会不到20％。不熟练操作者的判断错误，移植的动作粗暴和移植时间太长都会降低妊娠率。

5提高牛胚胎移植妊娠率的主要措施

影响牛胚胎移植妊娠率的因素很多，涉及到胚胎移植的每一个环节，因此，要获得理想的胚胎移植妊娠率，除了要注意供体和受体的选择、受体的饲养管理、受体所处的环境和人员素质外，可采取如下措施提高牛胚胎移植妊娠率。

5．1选择优质冻胚或采用鲜胚移植

冻胚一般都由商家提供，在购买牛冻胚时，除了考虑品种的纯正外，更重要的是考虑胚胎的质量，一般用于制作冻胚的胚胎都要求是B级以上冻胚，在选购时最好是选A级胚胎制作的冻胚。胚胎的质量是移植成功的保证，所以一定要选择守信誉和熟悉的单位提供冻胚，如有可能应派技术人员参与冻胚的制作过程。养殖场自己有供体种牛的，可采用鲜胚移植，这样既可确保胚胎的质量，又可提高移植妊娠率，但需做好供、受体牛的同期化处理工作和饲养管理工作。

5．2  补充营养

我国有丰富的黄牛资源，用本地黄牛作受体生产纯种肉牛或高产奶牛是最理想的胚胎移植模式。然而，农养情况下的本地黄牛普遍营养不足，这样会导致青年母牛初情期推迟、成年母牛出现乏情、发情周期不正常、卵泡发育和排卵迟缓、早期胚胎发育与附植受阻等问题的存在，造成母牛繁殖力低、同期发情效果不一等。加强饲养管理，尽可能为受体牛供给优质足量的粗饲料和营养均衡的精饲料，以及适当补加维生素A、D：E和微量元素，是保证牛群具有正常繁殖机能和更好的同期发情效果的关键。补充营养一般有二种方法，一是在同期发情处理时注射维生素A、D、E复合制剂，二是在移植前2个月左右开始补饲混合精料，前一种方法效果不是很明显，现介绍补饲混合精料的方法：将按胚胎移植要求选择出来拟作受体的母牛集中统一饲养，在正常放牧或舍饲喂给粗料的基础上，每头每天补饲混合精料1．6 kg，早晚各补O．8 kg，补饲50～60 d，补饲混合精的参考配方为：玉米60％、豆粕13％、菜籽饼9％、糠14．7％、磷酸氢钙2％、盐1％、微量元素维生素添加剂O．3％。

5．3子宫净化

胚胎植入受体子宫后能否继续完成着床直至发育成为胎儿到产出，与子宫的健康状况直接相关，因此，确保受体牛子宫的健康无病是胚胎移植首要条件。本地黄牛在进行人工授精和助产时，由于器械的消毒不严和环境不卫生，使经产母牛易患生殖道炎症等繁殖疾病，其发病率高达70％，所以对受体母牛进行炎症的预防和治疗很有必要。子宫净化是奶牛场对经产母牛常采用的一种防止炎症加快子宫恢复提高配种受胎率的一项技术措施，一般都是用自配抗生素冲洗液或中草药制剂进行冲洗，经子宫净化处理，妊娠率可提高15％至25％。这一技术措施在用本地黄牛作受体进行胚胎移植时也可以借鉴使用。具体的冲洗药物多种多样，可由兽医人员选定，现介绍我们常用的一种对产后二个月内的母牛处理方法：用青霉素80万IU、链霉素100万IU和氯前列烯醇2 mL，加生理盐水稀释至40 mL注入子宫。

5．4提高操作者的技术水平

牛的胚胎移植现一般采用的是非手术法，它是一项操作技能要求很高的专业技术，要求操作者具有坚实的理论基础、娴熟的操作技能和丰富的实践经验，在牛的胚胎移植推广应用过程中，之所以会出现妊娠率差异很大的问题，主要原因之一就是移植者操作技术水平高低不等造成。熟练的操作者可以准确判断受体牛的子宫环境是否适宜植入胚胎，在操作时能快速准确地将胚胎植人有黄体则子宫角的上三分之一处，并且不会损伤子宫内膜；反之由于经验不足在操作时就会出现判断不准，动作粗暴，操作时间长，移植不到位，损伤子宫内膜等情况，这样的结束果自然不可能获得高的移植妊娠率。目前牛的胚胎移植技术已进入推广应用阶段，但具有较高移植水平的技术人员又多在研究部门，所以要想整体提高我国胚胎移植技术水平，应当更加广泛地普及胚胎移植知识，加强对基层技术人员的培训力度，提高相关的理论水平，重视胚胎移植的操作训练。在培训方法上应当由科研单位的科技人员编制《牛胚胎移植操作规程》，并选择基层应用单位的人工授精技术人员进行培训，培训要理论学习和实际操作同时进行，只有当基层应用单位的技术人员全面掌握了胚胎移植的理论知识和操作技术要领，并通过考核确实能独立操作后，才能从事牛的胚胎移植工作。如能在胚胎移植上推行持证上岗，将更有利于操作技术水平的提高。总之，胚胎移植技术人员的操作熟练程度直接影响妊娠率的高低，操作者要在工作中不断地总结经验和学习，提高操作技能，使自己成为一名胚胎移植高手。

5．5选择好移植季节牛是常年发情动物，从理论上讲季节不会对牛的繁殖行为有多大影响，但在农养情况下，由于不同的季节会对牧草的生长和营养有影响作用，这样会出现母牛在不同的季节膘情和健康情况的差异，这样会对牛的的繁殖力产生影响；另一方面高温和严寒会使牛产生应激反应，将影响胚胎移植的妊娠率。实验证明，胚胎移植最适宜的时间是在秋末，这时的母牛膘肥体壮，气候适宜，对母牛的应激影响因素较少，有利于胚胎移植妊娠率的提高；其次南方可以选择在冬季移植，北方可以选择在春季移植；炎热的夏季不宜开展牛胚胎移植工作，这时移植的妊娠率会明显低于秋季。胚胎移植是一个系统工程，影响其妊娠率的因素很多，其中所涉及的每个技术环节都十分重要，一个步骤的大意，都会造成胚胎移植的失败，只有严格、认真、规范地做好每个环节的工作，尽可能地排除一切对胚胎移植的不利因素，才能确保胚胎移植的成功，提高移植妊娠率。

何光中，杨红文(贵州省畜牧兽医研究所，贵州贵阳550005)

中国牛业科学  2008年第34卷总第149期双月刊第4期